haku: @keyword Elisa / yhteensä: 4
viite: 2 / 4
| Tekijä: | Ekman, Malin |
| Työn nimi: | Surface display of proteins on yeast cells |
| Julkaisutyyppi: | Diplomityö |
| Julkaisuvuosi: | 2015 |
| Sivut: | 83 + 12 Kieli: eng |
| Koulu/Laitos/Osasto: | Kemian tekniikan korkeakoulu |
| Oppiaine: | Bioteknik och livsmedelsteknik (KE3002) |
| Valvoja: | Frey, Alexander |
| Ohjaaja: | Lipps, Georg |
| Elektroninen julkaisu: | http://urn.fi/URN:NBN:fi:aalto-201509184358 |
| Sijainti: | P1 Ark Aalto 3023 | Arkisto |
| Avainsanat: | yeast surface display Aga1/Aga2 Cwp2 Sed1 ELISA FACS presentation på jästyta |
| Tiivistelmä (eng): | Microbial cell surface display is the technique of expressing proteins of interest (targets) as genetic fusions to anchoring motifs on the surface of a microbial cell. It is a powerful tool for biotechnical applications such as mutant library screening and whole cell biocatalysts. Surface display has been carried out using phages, bacteria and yeast as host cells. Yeast as a eukaryotic organism has the advantage of being able to fold complex eukaryotic proteins and was investigated in this study. The aim was to optimize a yeast surface display method by comparing three anchor proteins against each other; Aga1p/Aga2p, Cwp2p and Sed1p. Two model target proteins, CelA and calmodulin, were expressed in yeast as fusions to the anchor proteins. The expression was analysed with ELISA, flow cytometry and an activity assay for CelA. The results showed that the most frequently used Aga1p/Aga2p surface display system is clearly the most efficient one in this comparison. Furthermore, it could be concluded that the host strain does not affect the expression as significantly as the choice of the anchor protein. Whole cell ELISA showed to be a useful addition to flow cytometry for expression analysis. |
| Tiivistelmä (swe): | Presentation på mikrobytor är en teknik där man uttrycker ett protein så att det förs till utsidan av mikrobens cellvägg. Detta är möjligt genom att introducera rekombinant DNA bestående av proteinet man vill uttrycka, ett cellväggsprotein som förs till ytan samt en stark promotor till värdorganismen. Det är ett användbart verktyg för bland annat mutantsållning och utveckling av biokatalyter. Proteiner har uttrycks på fag-, bakterie- och jästytor. Jäst användes i denna studie eftersom den som en eukaryot organism har de mekanismer som krävs för korrekt veckning av komplexa människoproteiner. Syftet med arbetet var att utveckla en metod för presentation på jästytor och maximera mängden uttryckt protein genom att jämföra tre olika cellväggsproteiner; Aga1p/Aga2p, Cwp2p och Sed1p. Två modellprotein, CelA och calmodulin, uttrycktes i kombination med cellväggsproteinerna. Expressionsanalysen utgjordes av ELISA (enzyme-linked immunosorbant assay), FACS (fluorescence activated cell sorting) och mätning av enzymaktiviteten för CelA. Utgående från resultaten kunde det konstateras att Aga1p/Aga2p kunde föra mest protein till jästens cellvägg. Det visade sig även att jäststammen inte hade någon avsevärd inverkan på uttryckandet av protein. ELISA kunde vidare konstateras vara ett nyttigt tillägg till FACS för expressionsanalys. |
| ED: | 2015-09-27 |
INSSI tietueen numero: 52075
+ lisää koriin
INSSI