haku: @supervisor Nordström, Katrina / yhteensä: 194
viite: 18 / 194
| Tekijä: | Jaatinen, Hannakaisa |
| Työn nimi: | Development of a combined antibody gene library and selection of novel binding specificities from the library |
| Yhdistelmä vasta-ainegeenikirjaston rakentaminen ja uusien vasta-aineiden seulominen kirjastosta | |
| Julkaisutyyppi: | Diplomityö |
| Julkaisuvuosi: | 2014 |
| Sivut: | iii + 102 s. + liitt. 7 Kieli: eng |
| Koulu/Laitos/Osasto: | Biotekniikan ja kemian tekniikan laitos |
| Oppiaine: | Biotekniikka ja elintarviketekniikka (KE3002) |
| Valvoja: | Nordström, Katrina |
| Ohjaaja: | Tullila, Antti ; Nevanen, Tarja |
| Elektroninen julkaisu: | http://urn.fi/URN:NBN:fi:aalto-201412153229 |
| OEVS: | Sähköinen arkistokappale on luettavissa Aalto Thesis Databasen kautta.
Ohje Digitaalisten opinnäytteiden lukeminen Aalto-yliopiston Harald Herlin -oppimiskeskuksen suljetussa verkossaOppimiskeskuksen suljetussa verkossa voi lukea sellaisia digitaalisia ja digitoituja opinnäytteitä, joille ei ole saatu julkaisulupaa avoimessa verkossa. Oppimiskeskuksen yhteystiedot ja aukioloajat: https://learningcentre.aalto.fi/fi/harald-herlin-oppimiskeskus/ Opinnäytteitä voi lukea Oppimiskeskuksen asiakaskoneilla, joita löytyy kaikista kerroksista.
Kirjautuminen asiakaskoneille
Opinnäytteen avaaminen
Opinnäytteen lukeminen
Opinnäytteen tulostus
|
| Sijainti: | P1 Ark Aalto 2558 | Arkisto |
| Avainsanat: | phage display antibody hapten chain shuffling vasta-aine hapteeni faaginäyttö tekniikka chain-shuffing -tekniikka |
| Tiivistelmä (fin): | Tämän diplomityön tarkoituksena oli rakentaa yhdistelmä vasta-ainegeenikirjasto, josta voitaisiin eristää vasta-aineita pieniä molekyylejä vastaan kirjastoille tehdyistä immunisoinneista riippumatta, sekä määrittää kirjaston toimivuus. Yhdistelmä vasta-ainegeenikirjasto rakennettiin jo olemassa olevista vasta-ainegeenikirjastoista chain shuffling -tekniikkaa hyödyntäen. Ketjujen vaihto (chain shuffling) suoritettiin raskaiden ketjujen vaihdoilla kirjastojen välillä ja kevyet ketjut pysyivät koskemattomina phagemid-vektorissa. Rakennetun vasta-ainekirjaston kooksi saatiin 9,7·107 erilaista vasta-ainekloonia. Kirjaston toimivuus määritettiin seulomalla vasta-aineita neljää eri antigeenia (hapteenia) vastaan. Nämä hapteenit olivat foolihappo, koolihappo, B12 vitamiini sekä aflatoksiini M1. Yhtä valituista antigeeneistä oli käytetty immunisoinnissa sen alkuperäistä kirjastoa varten. Seulonta tehtiin kahdella eri seulontamenetelmällä. Fab-fragmentit ilmennettiin filamentti-faagien pinnalla ja spesifit vasta-aineet tehoseulottiin magneettihelmiprosessorilla. Seulotut vasta-ainekloonit analysoitiin ELISA-testiä käyttäen. Lupaavimmat vasta-ainekloonit sekvensointiin diversiteetin selvittämiseksi. Kaiken kaikkiaan yksi foolihappo vasta-aineklooni saatiin seulottua ensimmäisellä menetelmällä. Toisella menetelmällä saatiin yksi B12 vitamiini vasta-aineklooni ja ainakin 11 aflatoksiini M1 vasta-ainekloonia. Koolihappo vasta-ainekloonien määrää ei ehditty määrittämään. Tulokset osoittavat, että chain shuffling -tekniikalla rakennetusta kirjastosta voidaan seuloa vasta-aineita sellaisia antigeenejä vastaan, joita ei ole käytetty immunisoinneissa. Tässä työssä käytettiin jo olemassa olevia vasta-ainegeenikirjastoja, mistä johtuen uutta immunisointia ei tarvinnut tehdä tämän työn suorittamiseksi. Täten chain shuffling -tekniikkaa hyödyntämällä voidaan vähentää koe-eläinten käyttöä ja uusia vasta-aineita voidaan seuloa nopeammin, kun uutta kirjastoa ei tarvitse rakentaa jokaisen uuden vasta-aineen seulomista varten. |
| Tiivistelmä (eng): | The aim of this master's thesis was to construct a combined antibody gene library from which antibodies against small molecules could be obtained independent from the immunization history, and to evaluate a functionality of the constructed library. The combined antibody gene library was constructed with a chain shuffling technique by using three immunized libraries. The chain shuffling was performed by shuffling the heavy chains while the light chains remained intact in a phagemid vector. The functional library size was 9,7·107. The functionality of the constructed library was evaluated by a selection of antibodies from the library against four different small antigens (haptens): folic acid, cholic acid, vitamin B12 and aflatoxin M1. One of the antigens used in a selection had been used in the immunization of the original libraries and the three other antigens had not. The selection was carried out using two different selection protocols. The Fab fragments of antibodies were displayed on filamentous bacteriophages and specific antibodies were selected in a high-throughput format with a magnetic bead processor. The selected clones were screened manually using an ELISA method. Based on the results of the primary screenings, further characterization was performed by a secondary and a competitive ELISA. The most promising clones were sequenced in order to see the diversity of the selected antibody clones. All in all, two different anti- folic acid clones were obtained by the first selection protocol. By the second selection protocol, 1 anti- vitamin B12 clone and at least 11 unique anti- aflatoxin M1 clones were obtained. The number of anti- cholic acid clones was not determined because of insufficient time. These results indicate that the chain shuffled library was successful for the selection of antibodies against antigens which have not been used in the immunization. In this thesis work already existing antibody gene libraries were utilized and new immunizations were not performed for this work. Thus, by developing libraries by chain shuffling technique, the use of animals can be decreased and new antibodies can be obtained in a more time efficient manner. |
| ED: | 2014-12-21 |
INSSI tietueen numero: 50237
+ lisää koriin
INSSI