haku: @instructor Ojamo, Heikki / yhteensä: 23
viite: 12 / 23
Tekijä: | Weymarn, Niklas von |
Työn nimi: | Betaiinisynteesi geneettisesti muokatulla Escherichia colilla |
Betaine biosynthesis in genetically modified Escherichia coli | |
Julkaisutyyppi: | Diplomityö |
Julkaisuvuosi: | 1999 |
Sivut: | 100 Kieli: fin |
Koulu/Laitos/Osasto: | Kemian tekniikan osasto |
Oppiaine: | Bioprosessitekniikka (Kem-70) |
Valvoja: | Leisola, Matti |
Ohjaaja: | Ojamo, Heikki |
OEVS: | Sähköinen arkistokappale on luettavissa Aalto Thesis Databasen kautta.
Ohje Digitaalisten opinnäytteiden lukeminen Aalto-yliopiston Harald Herlin -oppimiskeskuksen suljetussa verkossaOppimiskeskuksen suljetussa verkossa voi lukea sellaisia digitaalisia ja digitoituja opinnäytteitä, joille ei ole saatu julkaisulupaa avoimessa verkossa. Oppimiskeskuksen yhteystiedot ja aukioloajat: https://learningcentre.aalto.fi/fi/harald-herlin-oppimiskeskus/ Opinnäytteitä voi lukea Oppimiskeskuksen asiakaskoneilla, joita löytyy kaikista kerroksista.
Kirjautuminen asiakaskoneille
Opinnäytteen avaaminen
Opinnäytteen lukeminen
Opinnäytteen tulostus
|
Sijainti: | P1 Ark TKK 4465 | Arkisto |
Tiivistelmä (fin): | Äärimmäisen halofiilisen Ectothiorhodospira halochloris -eubakteerin betaiinisynteesiä koodaavat geenit kloonattiin Escherichia coliin, jossa betaiinisynteesin merkitystä tutkittiin suola- ja sokeristressissä kasvavilla soluilla. Työn kirjallisuusosassa tarkasteltiin E. colin sopeutumista kasvuympäristön aiheuttamaan osmoottiseen stressiin. Kirjallisuusosassa selvitettiin myös osmolyyttien suojaavia ominaisuuksia ja ennen kaikkea paneuduttiin betaiinin merkitykseen osmolyyttinä. Lopuksi käytiin lyhyesti läpi muita soluja stressaavia olosuhteita ja tarkasteltiin kirjallisuuden pohjalta onko betaiinilla havaittu olevan merkitystä myös näissä olosuhteissa. Työn tutkimusosan alkuperäisenä tarkoituksena oli rekombinantti-E. coli-kantojen kasvattaminen fermentorimittakaavassa. Plasmidistabiilisuusongelmien vuoksi päädyttiin kuitenkin hyvin aikaisessa vaiheessa takaisin pullomittakaavan kokeisiin. Ensisijaiseksi tavoitteeksi muotoutui kyseisten stabiilisuusongelmien ratkaiseminen. Stabiililla E. coli-kloonilla tutkittiin betaiinisynteesin ja betaiinin akkumuloitumisen merkitystä solun kasvuun korkean suola- ja sokeripitoisuuden aiheuttamassa osmoottisessa stressissä. Lisäksi tehtiin alustavia kokeita, joissa selvitettiin akkumuloiko solu betaiinia, kun hapen saatavuus on rajoitettua. Kloonatun de novo synteesireitin tuottaman betaiinin havaittiin stimuloivan E. coli XL1-Blue-kannan kasvua mineraalikasvuliuoksessa 0,3, 0,4, 0,5 ja 0,6 M NaCl-pitoisuuksissa. Suolastressissä kasvava E. coli akkumuloi kuitenkin huomattavasti enemmän kasvuliuokseen lisättyä betaiinia kuin syntetisoimaansa betaiinia, jonka seurauksena myös parhaat solusaannot määritettiin kasvuliuoksissa, joihin oli lisätty betaiinia. Tulokset viittaavat siihen, että de novo betaiinibiosynteesiä E. colissa rajoittaa pikemmin prekursoreiden (esim. S-adenosyylimetioniini) saatavuus kuin kyseisten geenien ekspressiotaso. Betaiinin syntetisointi stimuloi E. coli XLI-Blue-kannan kasvua myös korkeissa sakkaroosipitoisuuksissa (150 ja 200 g l [-1]). Sen sijaan korkeassa glukoosipitoisuudessa E. coli ei hyötynyt betaiinisynteesireitistä. Lisäksi havaittiin, että betaiinin syntetisointi stimuloi E. colin kasvua, kun hapen saatavuus oli rajoitettua. |
ED: | 1999-06-18 |
INSSI tietueen numero: 14474
+ lisää koriin
INSSI