haku: @keyword / yhteensä: 766
viite: 14 / 766
| Tekijä: | Järvihaavisto, Erika |
| Työn nimi: | DNA origami-based in vitro delivery vehicles |
| DNA-origami-pohjaiset in vitro -kuljettimet | |
| Julkaisutyyppi: | Diplomityö |
| Julkaisuvuosi: | 2016 |
| Sivut: | 62 s. + liitt. 6 Kieli: eng |
| Koulu/Laitos/Osasto: | Sähkötekniikan korkeakoulu |
| Oppiaine: | Biologinen kemia ja biomateriaalit (KE3005) |
| Valvoja: | Kostiainen, Mauri |
| Ohjaaja: | Linko, Veikko |
| Elektroninen julkaisu: | http://urn.fi/URN:NBN:fi:aalto-201605122001 |
| Sijainti: | P1 Ark Aalto 4278 | Arkisto |
| Avainsanat: | DNA origami DNA nanotechnology drug delivery vehicle Streptavidin-Lucia luciferase enzyme in vitro DNA-nanoteknologia lääkeainekuljetin |
| Tiivistelmä (fin): | DNA-nanoteknologia tarkoittaa keinotekoisten nanomittakaavan rakenteiden ja funktionaalisten materiaalien muodostamista DNA:sta. DNA-nanorakenteiden nopea kehitys on innostanut tutkijoita kehittämään niistä erilaisia lääkeainekuljettimia kohdennettuun lääkeannosteluun. Monimutkaisia DNA-rakenteita voidaan muodostaa muun muuassa DNA-origami-tekniikalla, jota käsitellään tässä diplomityössä tarkemmin. Tässä diplomityössä tutkitaan putkimaisen DNA-origamin soveltuvuutta kuljettaa Streptavidin-Lucia luciferase -entsyymejä HEK293-solujen sisään in vitro. Transfektiota tutkittiin konfokaalimikroskoopilla, ja entsyymien aktiivisuutta solujen lysaateissa tarkasteltiin mittaamalla bioluminesenssia. Nämä DNA-origami-entsyymi-kompleksit päällystettiin myös kolmella erilaisella kationisella blokkipolymeerilla. Polymeeripeitteiden vaikutusta entsyymin aktiivisuuteen tutkittiin mittaamalla bioluminesenssia. Tulosten perusteella DNA-origamia voidaan käyttää kuljettamaan entsyymit solun sisään, ja entsyymit säilyttivät aktiivisuutensa transfektion jälkeen. Lisäksi kompleksin entsyymikinetiikkaa voidaan mahdollisesti kontrolloida säätämällä polymeerien määrää päällysteessä. Entsyymi ei kuitenkaan sitoutunut spesifisesti origamiin, ja origamin muoto ei näyttänyt vaikuttavan transfektion tehokkuuteen. Kompleksin stabiilisuutta ja eheyttä on tutkittava tarkemmin. |
| Tiivistelmä (eng): | The field of DNA nanotechnology aims to construct artificial nanoscale structures and functionalized materials from DNA. The rapid development of DNA nanotechnology has inspired researchers to develop various DNA-based drug delivery vehicles. One approach to build complex DNA nanostructures is to use the method of DNA origami, which is discussed in more detail in this thesis. This thesis examines the use of a tubular DNA origami as a cellular delivery vehicle for the transport of Streptavidin-Lucia luciferase enzymes into HEK293 cells in vitro. The correct folding of the origamis was evaluated using agarose gel electrophoresis and transmission electron microscopy. The transfection was studied using confocal microscopy and the activity of the delivered enzymes was detected in the cell lysates using a bioluminescence assay. These DNA origami-enzyme complexes were also coated with varying amounts of different cationic block-copolymers, and the effect of these coatings on the enzyme activity was investigated using the bioluminescence assay. According to the results, the DNA origami delivered the enzymes into cells and the enzymes remained active after transfection. The results also suggest that it is possible to control the enzyme kinetics of the complexes by varying the amount of cationic polymers that coat the DNA origamis. However, the enzymes were found to bind nonspecifically to the origamis, and it remains unclear whether the shape of the origami contributed to the transfection. The stability and integrity of the complexes should be studied more carefully. |
| ED: | 2016-05-22 |
INSSI tietueen numero: 53555
+ lisää koriin
INSSI